怎樣選擇高效液相色譜柱？

現代高效液相色譜中，分離效果好壞的一個(ge) 重要指標是色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇範圍很寬，為(wei) 選擇合適的，這裏總結三點色譜填料: 矽膠基質填料、聚合物填料、其他無機填料。

一．矽膠基質填料

1．正相色譜

   正相色譜用的固定相通常為(wei) 矽膠(Silica)以及其他具有極性官能團胺基團，如(NH2，APS)和氰基團(CN，CPS)的鍵合相填料。

   由於(yu) 矽膠表麵的矽輕基(SiOH)或其他極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份最先被衝(chong) 洗出色譜柱。

   正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如:正己烷(Hexane)、氯仿(Choroform)、二氯甲烷 (Methylene Cloride)等。

2．反相色譜

   反相色譜用的填料常是以矽膠為(wei) 基質，表麵鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。

   反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為(wei) 水、緩衝(chong) 掖與(yu) 甲醇、乙情等的混合物。

   樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組份最先被衝(chong) 洗出，而極性弱的組份會(hui) 在色譜柱上有更強的保留。

  常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H，(Phenyl)等。

二．聚合物填料

    聚合物填料多為(wei) 聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸醋等，其主要優(you) 點是在pH值為(wei) 1一14均可使用。

    相對於(yu) 矽膠基質的C18填料，這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。

    現有的聚合物填料的缺點是相對矽膠基質填料，色譜柱柱效較低。

三．其他無機填料

       其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化.由於(yu) 其特殊的性質,一般僅(jin) 限於(yu) 特殊的 用途.如石墨化碳也用於(yu) 正逐漸成為(wei) 反相色譜填料.這種填料的分離不同與(yu) 矽膠基質烷基 鍵合相,石墨化碳的表麵即是保留的基礎,不再需其它的表麵改性,該柱填料一般比烷基 鍵合矽膠或多孔聚合物填料的保留能力更強,石墨化碳可用於(yu) 分離某些幾何導構體(ti) ,又由 於(yu) HPLC流動相中不會(hui) 被溶解,這類柱可在任何PH與(yu) 溫度下使用.氧化鋁也可用於(yu) HPLC, 氧化鋁微粒剛性強,可製成穩定的色譜柱柱床,其優(you) 點是可在PH高達12的流動相中使用. 但由於(yu) 氧化鋁與(yu) 堿性化合物作用也很強,應用範圍受到一定的限製,所以未能廣泛應用, 新型氧化鋯填料也可用於(yu) HPLC,商品化的僅(jin) 有聚合物塗層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應 用PH範圍1～14,溫度可達100℃.由於(yu) 氧化鋯填料幾年才開始研究,加之麵臨(lin) 的實驗難 度,其重要用途與(yu) 優(you) 勢尚在進行中.