二手高效液相色譜儀HPLC係統產生的顆粒來源

        任何顆粒物進入HPLC係統後都會(hui) 在柱子入口端被篩板擋住，最後的結果是將柱子堵塞，表現出的特征是係統壓力增加並使色譜峰變形。因此，要采取各種預防措施，包括操作步驟和商品儀(yi) 器自身的各種過濾設計，努力防止或減少顆粒物進入HPLC係統中，從(cong) 而延長儀(yi) 器和色譜柱的使用壽命，並提高數據的可靠性。在二手高效液相色譜儀(yi) HPLC係統中，顆粒物的主要來源有三個(ge) 途徑：流動相、被測樣品和儀(yi) 器係統部件的磨損物。

1、流動相

        如果流動相均由高效液相色譜級溶劑組成，流動相沒有必要過濾。這是因為(wei) 高效液相色譜級的有機溶劑，例如乙腈、甲醇等，在製造的工藝過程中都已經過了0.2 μm微孔濾膜過濾。同樣的，無論你是買(mai) 的HPLC級的水還是在實驗室使用超純水淨化係統製備的水，最後一步也是通過0.2 μm微孔濾膜。然而，如果有任何一種緩衝(chong) 液中加入了固體(ti) 物，例如磷酸鹽，流動相過濾將是必要的一個(ge) 步驟。雖然緩衝(chong) 鹽可能是可溶解的、高純的，但它還是可能含有顆粒物質，例如在蓋試劑瓶的塑料內(nei) 蓋時，塑料瓶蓋子與(yu) 瓶口邊緣擠壓就會(hui) 產(chan) 生塑料顆粒。在這種情況下，添加的一種固體(ti) 物可能完全溶解了，但是少量雜質顆粒存在於(yu) 流動相中成為(wei) 殘渣。

        流動相通過0.45 μm微孔濾膜過濾對於(yu) 從(cong) 流動相中除去所有顆粒物是一個(ge) 有效方法。0.2 μm微孔濾膜也可以用，但是它們(men) 就這個(ge) 應用而言並不比0.45μm微孔濾膜更有效，而且它的過濾速度會(hui) 更慢，特別是當實驗室使用的試劑和水的質量不太好時。建議實驗室在編寫(xie) 製定他們(men) 流動相製備標準操作程序（SOPs）時規定，可以借鑒國際上同類實驗室的規定，即：
 流動相製備僅(jin) 采用HPLC級液體(ti) 時不需要過濾，反之所有流動相組成在使用前必須過濾。

        在連接儲(chu) 液瓶和泵的輸液管的末端入口采用下沉式過濾器，常見材質有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩(liang) 種，也是很重要的。這個(ge) 過濾器的規格為(wei) ≥10 μm的微孔物質，所以它不能取代流動相過濾步驟，但是它能除去係統中的塵土並保證儲(chu) 液瓶、輸液管使用的可靠性。

2、被測樣品

        液相係統中的第二個(ge) 顆粒物來源是被測樣品。一些實驗室在將他們(men) 的樣品放置在自動進樣器盤（或手動進樣）以前，所有樣品都先通過一個(ge) 0.45 μm針筒式過濾器過濾。這是一個(ge) 有效除去被測樣品中顆粒物的方法。但是這個(ge) 過程也有一點需要關(guan) 注：你使用了針筒式過濾器就不可能100%得到通過過濾器的被測樣品，總會(hui) 有或多或少的丟(diu) 失。丟(diu) 失來自這樣幾方麵：過濾器濾膜的吸附、過濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過濾器與(yu) 針筒連接處的滲漏等。如果有丟(diu) 失，過濾後液體(ti) 中被測物的含量或濃度與(yu) 原基本樣液的含量或濃度還相同嗎？這個(ge) 問題一般需要通過實驗確認。確認這步是要增加工作量和費用的。過濾器的使用是一種消耗，每個(ge) 過濾器的價(jia) 格從(cong) 幾元到十幾元。但在做食品中殘留物分析時，由於(yu) 基質大多比較複雜，所以過濾這步已成為(wei) 不可或缺的一步。在實際分析工作中，一般檢測每一組樣品會(hui) 帶一個(ge) 外標、一個(ge) 添加回收或是質控樣品，所以，隻要最終檢測時得到的信噪比能滿足檢出限要求，可將這步視為(wei) 係統誤差而忽略。

3、儀(yi) 器係統部件的磨損物

        最後，在HPLC係統中顆粒物的另一個(ge) 主要來源是輸液泵密封墊和進樣閥旋轉軸的磨損。關(guan) 於(yu) 輸液泵密封墊的磨損更換有兩(liang) 種不同建議。

        建議一，在一般實驗室中輸液泵密封墊通常使用壽命為(wei) 六個(ge) 月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊，實驗室應基於(yu) 上述觀點製定定期預防性維護計劃。該觀點認為(wei) ：與(yu) 輸液泵密封墊顆粒堵塞柱子而更換新柱子的費用相比，更換密封墊的費用低些。一些輸液泵有玻璃砂芯或篩網，可在流路中濾掉從(cong) 泵密封墊磨損下來的顆粒物，防止這些顆粒物隨流動相流至柱頭。若有這種裝置應查閱輸液泵操作手冊(ce) ，查看推薦的這種過濾器清洗或更換的間隔。

     建議則二，原裝密封墊的密封效果最好，更換以後容易引起流動相滲漏。所以，隻要不漏液就不要輕易更換密封墊。

     自動進樣器旋轉軸的密封隨著使用時間也會(hui) 磨損，但是在我的經驗中，即便是高負荷的運轉旋轉軸密封墊也可以使用幾年。如果你的自動進樣器係統有計數進樣閥轉動次數的功能，你可以設定一個(ge) 警鈴當預設閥轉動次數已達到時提醒你。曾有一種說法，進樣器最多轉動20,000次，這僅(jin) 僅(jin) 是進樣10000個(ge) ；但這似乎不是實驗室涉及的常規樣品分析使用壽命，它們(men) 的實際使用壽命會(hui) 更長。旋轉軸密封磨損後會(hui) 滲液，比較明顯的特征是同一樣品多次進樣後，峰麵積值差別比較大（RSD>5%）。當然，輸液泵的密封墊和旋轉軸的密封墊磨損將增加更多研磨物在流動相中，加速對這些部件的損傷(shang) 。此外，如果你日常運行的流動相有緩衝(chong) 鹽，如磷酸緩衝(chong) 鹽，密封墊的磨損會(hui) 更快。

       無論顆粒物源於(yu) 何物，實驗時都要將其除去。推薦在二手高效液相色譜儀(yi) HPLC係統中采用一個(ge) 0.45或0.5 μm的在線多孔過濾器，接在自動進樣器和柱子之間，即使已使用了保護柱。這個(ge) 在線過濾器將成為(wei) 擋板代替柱頭的濾板，而且如采用一個(ge) 玻璃砂芯濾板，既便宜，更換又方便。若采用在線過濾，HPLC係統檢測每批樣品開始前記錄下壓力值，當壓力上升一定值，例如25%或增加500psi，應該更換玻璃砂芯濾板了，更換以後衝(chong) 洗幾分鍾係統將恢複到原來的壓力值。