GC/Q-TOF氣相色譜/四極杆飛行時間質譜儀方案應用1

GC/Q-TOF氣相色譜/四極杆飛行時間質譜儀(yi) 方案應用1

使用安捷倫(lun) 7200 係列 GC/Q-TOF 係統和 Mass Profiler Professional（MPP）軟件對酵母類固醇進行了代謝輪廓分析，用來精確測定新型潛在抗真菌藥物的靶酶。將相對濃度 的麥角甾醇生物合成中間體(ti) 的靶標分析和非靶標分析相結合，再賦予精確質量的高分辨 GC/Q-TOF 技術，可以獲得最全麵的結果。電子電離（EI）的全采集模式質譜圖結合 MS/MS 產(chan) 物離子質譜數據，進一步確保了酵母中藥物治療蓄積化合物定性的準確性。

芽殖酵母釀酒酵母因為(wei) 其簡單而且菌株可適用於(yu) 基因組中所有基因的個(ge) 體(ti) 缺失而成為(wei) 一 種廣受歡迎的模式生物。本研究使用釀酒酵母對新型抗真菌藥物進行評價(jia) 。這一藥物家 族以麥角甾醇，一種真菌細胞膜的重要組成部分為(wei) 作用靶標。麥角甾醇和動物細胞中的 膽固醇功能相似。雖然如此，但很多參與(yu) 酵母類固醇生物合成的酶在結構和特異性上與(yu) 哺乳動物細胞中相應的酶有很大的差別。因此，那些抑製麥角甾醇生物合成路徑的藥物 通常具有抗真菌的治療潛力。這些藥物可以通過互補性遺傳(chuan) 和分析方法確定。作為(wei) 分析 通量最高的方法，曾有文獻進行過 Haploinsufficiency Profiling（HIP）篩查 。HIP 涉及了基因缺失的酵母對藥物的生長，造成菌株靈敏度升高，表明雜合位點的產(chan) 物可能 是抑製劑的靶標。除此之外，還可使用精確質量高分辨氣相色譜/四極杆-飛行時間質譜 （GC/Q-TOF）聯用進行酵母類固醇代謝物輪廓分析並與(yu) 遺傳(chuan) 學相結合專(zhuan) 用於(yu) 潛在藥物的靶酶鑒定。

使用安捷倫(lun) 7890 氣相色譜和 7200 係列 Q-TOF 質譜聯用儀(yi) 通過定性藥物治療後，蓄積的化合物對新興(xing) 抗真菌藥物的靶標物進行可靠的鑒定。首先用兩(liang) 種明確效果的抗真菌藥物 對方法進行驗證，接著對有潛在治療特性的新興(xing) 藥物進行測定。 較寬的儀(yi) 器線性範圍允許在酵母細胞的濃度範圍內(nei) 同時量化脂類 代謝產(chan) 物。 以麥角甾醇生物合成路徑中的靶中間體(ti) 以及藥物治療蓄積的非靶 代謝物對非治療樣本的相對水平為(wei) 基礎，提出了幾種潛在抗真菌 藥物作用於(yu) 酵母中固醇代謝的機理。此外，使用 MS/MS 產(chan) 物離 子的精確質量譜圖結合 Molecular Structure Correlator（MSC） 工具對某些蓄積的代謝產(chan) 物進行結構確認。

7200 係列 GC/Q-TOF 是一個(ge) 功能強大的分析工具，用來進行酵母類固醇代謝輪廓的掃描，識別公認抗真菌藥物的靶酶，與(yu) Haploinsufficiency Profiling 一起更詳盡地闡明藥物抑製機理。 7200 GC/Q-TOF 的精確質量信息和全譜圖的靈敏度可以對目標物 及藥物治療蓄積形成的未知化合物進行可靠的識別和定性。線性範圍高達 5 個(ge) 數量級，可以對整個(ge) 細胞濃度範圍內(nei) 的代謝物同時進行測定。 用此方法對幾種潛在抗真菌的藥物包括 NCE1181-0519 和桃柘酮的 作用機理進行了解析，這一過程通過經 Mass Profiler Professional 評估，中間體(ti) 濃度發生顯著變化的樣本同時進行靶標分析和非靶標分析實現的。此外，7200 GC/Q-TOF 通過精確質量 MS/MS 產(chan) 物離子譜圖與(yu) Molecular Structure Correlator 工具相結合，可對未知代謝物進行結構確認和解析。